W celu zbadania właściwości biochemicznych białka wiążącego się do jednoniciowego DNA (SSB) pochodzącego z Deinococcus geothermalis (DgeSSB), sklonowano gen ssb otrzymany w reakcji PCR, a następnie uzyskano wydajną biosyntezę białka DgeSSB. Gen składa się z 900 par zasad, kodujących białko złożone z 300 reszt aminokwasowych, o wyliczonej masie molekularnej równej 32.45 kDa. Sekwencja aminokwasowa wykazuje 43, 44% i 75% identyczności z sekwencją SSB pochodzącą z (odpowiednio) Thermus aquaticus, Thermus thermophilus i Deinococcus radiodurans. Wykazano, że DgeSSB ma podobne właściwości biochemiczne do białek SSB pochodzących z rodzaju Thermus/Deinococcus. DgeSSB zawiera dwa miejsca wiążące jednoniciowe DNA na monomer (tzw.OB fold) i funkcjonuje jako homodimer. W eksperymencie wygaszania fluorescencji z poly(dT) DgeSSB wiąże około 30 nt, a poziom wygaszania fluorescencji wynosi ok. 65%. W eksperymencie komplementacji funkcji SSB z Escherichia coli, DgeSSB wykazano zdolność komplementacji in vivo. DgeSSB jest termostabilne z okresem półtrwania wynoszącym 50 min w temperaturze 70 stC i 5 min w temp 90 stC. W związku z tym DgeSSB może stanowić atrakcyjną alternatywę dla znanych do tej pory termostabilnych białek TaqSSB i thSSB w zastosowaniach związanych z technikami biologii molekularnej i innych technikach analitycznych.
Authors
Additional information
- DOI
- Digital Object Identifier link open in new tab 10.1007/s00203-006-0128-2
- Category
- Publikacja w czasopiśmie
- Type
- artykuł w czasopiśmie z listy filadelfijskiej
- Language
- angielski
- Publication year
- 2006
