Repozytorium publikacji - Politechnika Gdańska

Enzymy lipolityczne, głównie lipazy i esterazy, stanowią cenną grupę biokatalizatorów wykorzystywanych w przemyśle. Coraz większe zainteresowanie tą klasą enzymów sprawiło, że poszukuje się alternatywnych źródeł ich pozyskiwania. W celu zbadania wpływu białek transportu ABC Pseudoalteromonas sp. 643A na ekspresję genu, sekrecję i aktywność esterazy EstA z tego mikroorganizmu w systemie ekspresyjnym E. coli skonstruowano układ do koekspresji genu esterazy i trzech komponentów systemu sekrecji typu I. Dla wydajnej ekspresji genu esterazy EstA wybrano wektor pET30b(+), którego liczba kopii przypadająca na komórkę gospodarza jest stosunkowo wysoka. Do ekspresji genów abc1, abc2, abc3 w układzie tricistronowym wykorzystano niskokopijny wektor ekspresyjny pACYC-pBAD, a w celu zwiększenia wydajności translacji poszczególnych cistronów wprowadzono sekwencje wiązania rybosomu. Wykazano, że komponenty transportu ABC wpływają na wzrost aktywności esterazy EstA, wydzielanej na zewnątrz komórek E. coli. Stwierdzono, że za proces fałdowania enzymu prawdopodobnie odpowiedzialne jest białko ABC3, a białka ABC1 i ABC2 pełnią w tym wypadku funkcje pomocnicze.

Autorzy

• Anna Długołęcka link otwiera się w nowej karcie ,
• dr hab. inż. Hubert Cieśliński link otwiera się w nowej karcie ,
• Marianna Turkiewicz,
• Aneta Białkowska,
• prof. dr hab. Józef Kur link otwiera się w nowej karcie