Skonstruowano oddzielnie dwie domeny syntazy GlcN-6-P z Candida albicans jako białka fuzyjne, tj. domenę glutaminazową oraz domenę izomerazową, zawierające sekwencje poliHis, odpowiednio na C- i N-końcu. Zoptymalizowano warunki nadekspresji domen w komórkach Escherichia coli. Oba białka oczyszczono do homogenności przy zastosowaniu chromatografii metalopowinowactwa oraz zbadano ich podstawowe właściwości. Wyznaczono parametry kinetyczne reakcji katalizowanych przez te białka. Określono wpływ znanych inhibitorów syntazy GlcN-6-P na aktywność izolowanych domen: DON, FMDP (domena gutaminazowa) oraz ADMP (domena izomerazowa). Stwierdzono, że obie domeny są w pełni funkcjonalne a obecność sekwencji poliHis nie ma wpływu na aktywność enzymatyczną.
Authors
Additional information
- Category
- Publikacja w czasopiśmie
- Type
- artykuł w czasopiśmie z listy filadelfijskiej
- Language
- angielski
- Publication year
- 2004
