Przedstawiono wyniki badań spektrofluorymetrycznych syntazy GlcN-6-P z Candida albicans oraz enzymu zmutowanego, w którym reszty Trp388 i 690 zostały zamienione na drodze ukierunkowanej mutagenezy na reszty Phe. Metodą spektrofluorymetryczną badano wpływ ligandów: Fru-6-P (substrat), Gln (substrat), UDP-GlcNAc (inhibitor), Glc-6-P (aktywator), DON (analog glutaminy) w odpowiednio dobranych stężeniach. Obecność większości efektorów skutkuje obniżeniem intensywności fluorescencji białek. Jest to skutek zmiany mikrootoczenia reszt Trp na bardziej hydrofilowe. Stwierdzono, że dodatek Gln nie powoduje żadnych zmian w widmie enzymu, co potwierdza wcześniejsze wyniki badań kinetycznych, iż wiązanie substratów przez syntazę GlcN-6-P ma charakter uporządkowany. Wykazano jednoznacznie, że związanie Fru-6-P w centrum aktywnym domeny izomerazowej wywołuje zmiany konformacyjne domeny glutaminowej. Udowodniono również istnienie dwóch różnych miejsc wiązania dla Glc-6-P i Fru-6-P.
Authors
Additional information
- Category
- Publikacja w czasopiśmie
- Type
- artykuł w czasopiśmie z listy filadelfijskiej
- Language
- angielski
- Publication year
- 2004
